Daar is baie onbesonge helde om ons, wat lyk asof hulle gewone is, maar eintlik dra hulle stilweg baie tot ons by.Proteïenase K is die "onbesonge held" in die molekulêre diagnostiese industrie, hoewel in vergelyking met die "groot en kragtige" in die bedryf, proteïenase K so laagtepunt is dat ons lankal die belangrikheid daarvan oor die hoof gesien het.Met die uitbreek van die nuwe kroonepidemie het die vraag na proteïenase K die hoogte ingeskiet, en die aanbod by die huis en in die buiteland is ver agter die verbruik, en almal het skielik besef dat proteïenase K so belangrik is.
Wat is die gebruik van proteïenase K?
Proteïenase K is 'n serienprotease met proteolitiese ensiemaktiwiteit en kan aktiwiteit in 'n wye reeks omgewings handhaaf (pH (4-12.5), hoë soutbuffer, hoë temperatuur van 70°C, ens.).Daarbenewens word die aktiwiteit van proteïenase K nie geïnhibeer deur SDS, ureum, EDTA, guanidienhidrochloried, guanidien-isotiosianaat, ens. nie, en 'n sekere hoeveelheid skoonmaakmiddel kan ook die aktiwiteit van proteïenase K verbeter. In mediese behandeling (virus- en mikrobiese ontsmetting) ), voedsel (vleisversagting), leer (hare sagmaak), wynmaak (alkohol verheldering), aminosuur voorbereiding (afgebreekte vere), nukleïensuur ekstraksie, in situ verbastering, ens., proteïenase K Daar is toepassings.Die mees algemene toepassing is nukleïensuurekstraksie.
Proteïenase K kan alle soorte proteïene in die monster ensiemoliseer, insluitend daardie histone wat styf aan nukleïensure gebind is, sodat die nukleïensure uit die monster vrygestel kan word en in die ekstrak vrygestel kan word, wat die volgende stap van ekstraksie en suiwering vergemaklik.In die opsporing van virale nukleïensuur is proteïenase K een van die belangrike komponente in die virusmonsteroplossing.Proteïenase K kan die pelsproteïen van die virus kraak en inaktiveer, wat veiliger is tydens die vervoer- en opsporingstadium;daarbenewens kan proteïenase K ook RNase afbreek, verhoed die afbraak van virale RNA en vergemaklik nukleïensuuropsporing.
Die oornag-roem van proteïenase K
Of dit nou op die gebied van wetenskaplike navorsing of op die gebied van IVD is, nukleïensuurekstraksie is die mees basiese eksperiment, so proteïenase K was nog altyd 'n baie belangrike bestaan.In die verlede was proteïenase K egter baie minder bekend as die rol daarvan.'n Groot deel hiervan was omdat die vraag- en aanbodverhouding van proteïenase K baie stabiel was.Min mense sou dink dat die voorsiening van proteïenase K 'n probleem sou wees.
Met die uitbreek van die nuwe kroonepidemie het die vraag na nukleïensuurtoetsing toegeneem.Teen einde Junie 2020 het China byna 90 miljoen nuwe kroontoetse voltooi, en hierdie getal is selfs meer kommerwekkend op 'n wêreldskaal.In nukleïensuur-ekstraksie-eksperimente is die werkende konsentrasie van proteïenase K ongeveer 50-200 μg/mL.Oor die algemeen neem dit ongeveer 100 μg proteïenase K om 'n monster nukleïensuur te onttrek.In werklike gebruik, om die doeltreffendheid van nukleïensuurekstraksie te verhoog, sal Proteïenase K dikwels in 'n groter hoeveelheid gebruik word.Nukleïensuuropsporing van die nuwe koronavirus het 'n groot hoeveelheid proteïenase K-vraag gebring.Die oorspronklike vraag- en aanbodbalans van proteïenase K is vinnig gebreek, en proteïenase K het oornag 'n belangrike epidemiese voorkomingsmateriaal geword.
Moeilikhede in die produksie van proteïenase K
Alhoewel met die ontwikkeling van die epidemie die belangrike waarde van proteïenase K deur mense gewaardeer is, is dit 'n verleentheid dat weens die oormatige lae-sleutel van proteïenase K, min plaaslike maatskappye betrokke was by die produksie van proteïenase K. Wanneer mense wil proteïenase K-produksie vestig Tydens die produksieproses is ontdek dat proteïenase K 'n uiters spesiale proteïen is.Dit is uiters uitdagend om die produksievermoë van proteïenase K in 'n kort tydperk uit te brei.
Die grootskaalse produksie van proteïenase K staar die volgende probleme in die gesig
1. Lae uitdrukking
Proteïenase K kan die meeste proteïene nie-spesifiek afbreek en ernstige toksisiteit vir die uitdrukkinggasheersel veroorsaak.Daarom is die uitdrukkingsvlak van proteïenase K oor die algemeen baie laag.Sifting van uitdrukkingstelsels en stamme wat proteïenase K hoogs uitdruk vereis oor die algemeen 'n langer siklus.
2. Reste van pigmente en nukleïensure
Grootskaalse fermentasie bring 'n groot hoeveelheid pigment- en gasheernukleinsuurreste in.Dit is moeilik om hierdie onsuiwerhede met 'n eenvoudige suiweringsproses te verwyder, en komplekse suiwering verhoog die koste en verlaag die hersteltempo.
3. Onstabiliteit
Proteïenase K is nie stabiel genoeg nie, dit kan homself ensiemaliseer, en dit is moeilik om dit vir 'n lang tyd stabiel by 37°C te stoor sonder 'n beskermende middel.
4. Maklik om te presipiteer
Wanneer die gevriesdroogde poeier van proteïenase K voorberei word, om te verseker dat die vastestofinhoud van proteïenase K in die gevriesdroogde poeier groot is, is dit nodig om 'n gevriesdroogde beskermende middel by 'n hoë konsentrasie by te voeg, maar wanneer die konsentrasie proteïenase K bereik 20mg/mL en hoër, is dit maklik. Die samevoeging vorm 'n neerslag, wat groot probleme meebring vir die vriesdroog van proteïenase K met 'n hoë vastestofinhoud.
5. Groot belegging
Proteïnase K het sterk protease-aktiwiteit en kan ander proteases in die laboratorium hidroliseer.Daarom benodig proteïenase K gespesialiseerde produksiegebiede, toerusting en personeel vir navorsing en ontwikkeling en produksie.
XD BIOCHEM se proteïenase K-oplossing
XD BIOCHEM het 'n volwasse proteïenuitdrukking en suiweringsplatform, en het ryk ervaring in die uitdrukking en suiwering van rekombinante proteïene en optimalisering van produksieprosesse.Deur die vinnige vorming van 'n navorsings- en ontwikkelingspan is die grootskaalse produksieproses van proteïenase K oorkom.Die maandelikse uitset van gevriesdroogde poeier is meer as 30 KG.Die produk het stabiele werkverrigting, hoë ensiem spesifieke aktiwiteit, en geen gasheer sitochroom en nukleïensuur residue.Welkom om XD BIOCHEM te kontak Kry 'n proefpakket (E-pos:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM se tegniese oplossings sluit in
Deur gebruik te maak van multi-kopie plasmied integrasie, word hoë-ekspressie stamme met 'n uitdrukking vlak van 8g/L geselekteer, wat die probleem van lae uitdrukking vlak van proteïnase K oorkom.
Deur die vestiging van 'n multi-stap suiweringsproses, is die gasheer sitochroom en nukleïensuurreste van proteïenase K suksesvol verwyder onder die standaard waarde.
Deur hoë-deurset sifting van beskermende buffer formulerings, is 'n buffer geselekteer wat proteïenase K stabiel by 37°C kan stoor.
Siftingsbuffers oorkom die probleem dat proteïenase K maklik is om saam te voeg en te presipiteer teen hoë konsentrasies, en lê die grondslag vir proteïenase K se hoë vastestof inhoud vriesdroog.
XD BIOCHEM proteïnase K monster
XD BIOCHEM proteïnase K stabiliteitstoets: daar sal geen beduidende verandering in aktiwiteit wees na 80 d by kamertemperatuur nie
XD BIOCHEM proteïnase K stabiliteitstoets: daar sal geen beduidende verandering in aktiwiteit wees na 80 d by kamertemperatuur nie.
Vergelyking van die nukleïensuur-ekstraksie-effek van XD BIOCHEM proteïnase K en mededingende produkte.In die proses van nukleïensuurekstraksie word XD BIOCHEM en kompeterende proteïenase K onderskeidelik gebruik.Die ekstraksiedoeltreffendheid van XD BIOCHEM proteïnase K is hoër en die Ct-waarde van die teikengeen is laer.
Postyd: 31 Desember 2021