4-Nitrofenyl beta-D-galaktopiranosied CAS:200422-18-0

Effek: ONPG is 'n substraat wat spesifiek gebruik word om die teenwoordigheid en aktiwiteit van die ensiem β-galaktosidase op te spoor.Wanneer β-galaktosidase-ensiem teenwoordig en aktief is, split dit ONPG in twee produkte: o-nitrofenol en 'n galaktose-derivaat.Die vrystelling van o-nitrofenol lei tot 'n geel kleurverandering, wat met 'n spektrofotometer gemeet kan word.

Toepassing: ONPG het verskeie toepassings in molekulêre biologie en biochemie navorsing:

Bepaling van β-galaktosidase-aktiwiteit: ONPG word algemeen gebruik om die aktiwiteit van β-galaktosidase-ensiem te meet en te kwantifiseer.Die tempo van o-nitrofenolvorming, wat direk eweredig is aan die ensiemaktiwiteit, kan spektrofotometries gemeet word.

Geenuitdrukking en regulering: ONPG word dikwels gebruik in eksperimente wat verband hou met geenuitdrukking en reguleringstudies.Dit word gereeld gebruik in samesmeltingsproteïentoetse, soos die algemeen gebruikte lacZ-fusiestelsel, om die uitdrukking van gene onder beheer van spesifieke promotors te bestudeer.Die beta-galaktosidase-aktiwiteit wat met ONPG gemeet word, verskaf insigte in die vlak van geenuitdrukking.

Sifting vir β-galaktosidase-aktiwiteit: ONPG kan as 'n kolorimetriese siftingsmetode in rekombinante DNA-tegnologie gebruik word om die teenwoordigheid en funksionaliteit van die LacZ-geen, wat β-galaktosidase kodeer, te identifiseer.Hierdie siftingsmetode help om klone te identifiseer wat die geen van belang bevat.

Ensiemkinetikastudies: ONPG is ook nuttig om die kinetika van β-galaktosidase-ensiem te bestudeer.Deur die tempo van ensiem-substraatreaksie by verskillende substraatkonsentrasies te meet, is dit moontlik om kinetiese parameters soos Michaelis-Menten-konstantes (Km) en maksimum reaksietempo's (Vmax) te bepaal.