4-Nitrofeniel beta-D-galaktopiranosied CAS: 200422-18-0

Effek: ONPG is 'n substraat wat spesifiek gebruik word om die teenwoordigheid en aktiwiteit van die ensiem β-galaktosidase op te spoor. Wanneer die β-galaktosidase-ensiem teenwoordig en aktief is, split dit ONPG in twee produkte: o-nitrofenol en 'n galaktose-derivaat. Die vrystelling van o-nitrofenol lei tot 'n geel kleurverandering, wat met 'n spektrofotometer gemeet kan word.

Toepassing: ONPG het verskeie toepassings in molekulêre biologie en biochemie-navorsing:

Bepaling van β-galaktosidase-aktiwiteit: ONPG word algemeen gebruik om die aktiwiteit van die β-galaktosidase-ensiem te meet en te kwantifiseer. Die tempo van o-nitrofenolvorming, wat direk eweredig is aan die ensiemaktiwiteit, kan spektrofotometries gemeet word.

Geenekspressie en -regulering: ONPG word dikwels gebruik in eksperimente wat verband hou met geenekspressie- en reguleringstudies. Dit word gereeld gebruik in fusieproteïentoetse, soos die algemeen gebruikte lacZ-fusiestelsel, om die uitdrukking van gene onder die beheer van spesifieke promotors te bestudeer. Die beta-galaktosidase-aktiwiteit wat met ONPG gemeet word, bied insigte in die vlak van geenekspressie.

Sifting vir β-galaktosidase-aktiwiteit: ONPG kan as 'n kolorimetriese siftingsmetode in rekombinante DNS-tegnologie gebruik word om die teenwoordigheid en funksionaliteit van die LacZ-geen, wat vir β-galaktosidase kodeer, te identifiseer. Hierdie siftingsmetode help om klone te identifiseer wat die geen van belang bevat.

Ensiemkinetika-studies: ONPG is ook nuttig in die bestudering van die kinetika van die β-galaktosidase-ensiem. Deur die tempo van ensiem-substraatreaksie by verskillende substraatkonsentrasies te meet, is dit moontlik om kinetiese parameters soos Michaelis-Menten-konstantes (Km) en maksimum reaksiesnelhede (Vmax) te bepaal.