Dithiothreitol (DTT) is 'n algemeen gebruikte reduseermiddel, ook bekend as die nuwe groen bymiddel.Dit is 'n klein molekulêre organiese verbinding met twee merkaptaangroepe (-SH).As gevolg van sy verminderende eienskappe en stabiliteit, word DTT wyd gebruik in biochemie en molekulêre biologie eksperimente.
Die hoofrol van DTT is om disulfiedbindings in proteïene en ander biomolekules te verminder.Die disulfiedbinding is 'n belangrike deel van proteïenvou en stabiliteit, maar onder sekere eksperimentele toestande, soos verminderbare SDS-PAGE-analise, proteïenrekombinasie en vou, is dit nodig om die disulfiedbinding na twee tiolgroepe te verminder om die ruimtelike struktuur van die proteïen.DTT kan met disulfiedbindings reageer om hulle tot merkaptaangroepe te reduseer, en sodoende die ruimtelike struktuur van die proteïen oopmaak en dit maklik maak om te ontleed en te manipuleer.
DTT kan ook gebruik word om ensiemaktiwiteit en stabiliteit te beskerm.In sommige ensiemgekataliseerde reaksies kan die aktiwiteit van die ensiem deur die oksidant verminder word.DTT kan met oksidante reageer om dit tot onskadelike stowwe te reduseer en sodoende die aktiwiteit en stabiliteit van die ensiem te beskerm.
In vergelyking met tradisionele reduseermiddels soos β-merkapto-etanol (β-ME), word DTT as 'n veiliger en meer stabiele reduseermiddel beskou.Dit is nie net stabiel in waterige oplossing nie, maar behou ook sy reducerende eienskappe onder hoë temperatuur en suur-basis toestande.
Die gebruik van DTT is relatief eenvoudig.Oor die algemeen word DTT in 'n toepaslike buffer opgelos en dan by die eksperimentele stelsel gevoeg.Die optimale konsentrasie van DTT moet bepaal word volgens die spesifieke eksperiment, en word gewoonlik in die reeks van 0.1-1mM gebruik.Laer konsentrasies kan nadelige effekte op selgroei verminder en kan sitotoksisiteit verminder as gevolg van ooruitdrukking van teikenproteïene.Hoër konsentrasies kan oormatige selmetaboliese las veroorsaak, wat selgroei en uitdrukkingsdoeltreffendheid beïnvloed.
Die manier om die optimale konsentrasie te bepaal kan wees om die uitdrukkingsvlak van die teikenproteïen te evalueer deur IPTG-induksietoetse by verskillende konsentrasies uit te voer.Kleinskaalse kultuurtoetse kan uitgevoer word deur gebruik te maak van 'n reeks IPTG-konsentrasies (bv. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ens.) en die uitdrukkingseffek by verskillende konsentrasies kan geëvalueer word deur die uitdrukkingsvlak van die teikenproteïen op te spoor (bv. Western klad of fluoressensie opsporing).Volgens die eksperimentele resultate is die konsentrasie met die beste uitdrukking effek as die optimale konsentrasie gekies.
Daarbenewens kan u ook na die relevante literatuur of die ondervinding van ander laboratoriums verwys om die algemeen gebruikte IPTG-konsentrasiereeks onder soortgelyke eksperimentele toestande te verstaan, en dan optimeer en aan te pas volgens die eksperimentele behoeftes.
Dit is belangrik om daarop te let dat die optimale konsentrasie kan wissel na gelang van verskillende uitdrukkingstelsels, teikenproteïene en eksperimentele toestande, dus is dit die beste om op 'n geval-tot-geval basis te optimaliseer.
Ter opsomming, DTT is 'n algemeen gebruikte reduseermiddel wat gebruik kan word om disulfiedbindings in proteïene en ander biomolekules te verminder en om ensiemaktiwiteit en stabiliteit te beskerm.Dit is wyd gebruik in biochemie en molekulêre biologie eksperimente.
Postyd: 28 September 2023