Ditiotreitol (DTT) is 'n algemeen gebruikte reduseermiddel, ook bekend as die nuwe groen toevoeging. Dit is 'n klein molekulêre organiese verbinding met twee merkaptaangroepe (-SH). As gevolg van sy reduseer-eienskappe en stabiliteit word DTT wyd gebruik in biochemie en molekulêre biologie-eksperimente.
Die hoofrol van DTT is om disulfiedbindings in proteïene en ander biomolekules te verminder. Die disulfiedbinding is 'n belangrike deel van proteïenvouing en -stabiliteit, maar onder sekere eksperimentele toestande, soos reduseerbare SDS-PAGE-analise, proteïenrekombinasie en -vouing, is dit nodig om die disulfiedbinding tot twee tiolgroepe te reduseer om die ruimtelike struktuur van die proteïen te ontrafel. DTT kan met disulfiedbindings reageer om hulle tot merkaptaangroepe te reduseer, wat die ruimtelike struktuur van die proteïen oopmaak en dit maklik maak om te analiseer en te manipuleer.
DTT kan ook gebruik word om ensiemaktiwiteit en stabiliteit te beskerm. In sommige ensiem-gekataliseerde reaksies kan die aktiwiteit van die ensiem deur die oksidant verminder word. DTT kan met oksidante reageer om hulle tot onskadelike stowwe te reduseer, waardeur die aktiwiteit en stabiliteit van die ensiem beskerm word.
In vergelyking met tradisionele reduseermiddels soos β-merkaptoetanol (β-ME), word DTT as 'n veiliger en meer stabiele reduseermiddel beskou. Dit is nie net stabiel in waterige oplossing nie, maar behou ook sy reduseer-eienskappe onder hoë temperatuur en suur-basis toestande.
Die gebruik van DTT is relatief eenvoudig. Oor die algemeen word DTT in 'n gepaste buffer opgelos en dan by die eksperimentele stelsel gevoeg. Die optimale konsentrasie DTT moet volgens die spesifieke eksperiment bepaal word en word gewoonlik in die reeks van 0.1-1 mM gebruik. Laer konsentrasies kan nadelige effekte op selgroei verminder en sitotoksisiteit as gevolg van oorekspressie van teikenproteïene verminder. Hoër konsentrasies kan oormatige selmetaboliese las veroorsaak, wat selgroei en ekspressie-doeltreffendheid beïnvloed.
Die manier om die optimale konsentrasie te bepaal, kan wees om die uitdrukkingsvlak van die teikenproteïen te evalueer deur IPTG-induksietoetse by verskillende konsentrasies uit te voer. Kleinskaalse kultuurtoetse kan uitgevoer word met behulp van 'n reeks IPTG-konsentrasies (bv. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ens.) en die uitdrukkingseffek by verskillende konsentrasies kan geëvalueer word deur die uitdrukkingsvlak van die teikenproteïen te bepaal (bv. Western blot of fluoresensiedeteksie). Volgens die eksperimentele resultate is die konsentrasie met die beste uitdrukkingseffek as die optimale konsentrasie gekies.
Daarbenewens kan u ook na die relevante literatuur of die ervaring van ander laboratoriums verwys om die algemeen gebruikte IPTG-konsentrasiebereik onder soortgelyke eksperimentele toestande te verstaan, en dan optimaliseer en aanpas volgens die eksperimentele behoeftes.
Dit is belangrik om daarop te let dat die optimale konsentrasie kan wissel na gelang van verskillende ekspressiestelsels, teikenproteïene en eksperimentele toestande, daarom is dit die beste om van geval tot geval te optimaliseer.
Kortliks, DTT is 'n algemeen gebruikte reduseermiddel wat gebruik kan word om disulfiedbindings in proteïene en ander biomolekules te verminder en om ensiemaktiwiteit en stabiliteit te beskerm. Dit is wyd gebruik in biochemie en molekulêre biologie-eksperimente.
Plasingstyd: 28 September 2023