Hoe om die optimale konsentrasie te bepaal?
Vir die induseerder IPTG (isopropyl-beta-d-tiogalaktosied), hoe hoër die konsentrasie, hoe beter.Die optimale konsentrasie hang af van die spesifieke eksperimentele toestande en die verlangde induksie effek.
Oor die algemeen word die konsentrasie van IPTG in die reeks van 0,1-1 mM gebruik.Laer konsentrasies kan nadelige effekte op selgroei verminder en kan sitotoksisiteit verminder as gevolg van ooruitdrukking van teikenproteïene.Hoër konsentrasies kan oormatige selmetaboliese las veroorsaak, wat selgroei en uitdrukkingsdoeltreffendheid beïnvloed.
Die manier om die optimale konsentrasie te bepaal kan wees om die uitdrukkingsvlak van die teikenproteïen te evalueer deur IPTG-induksietoetse by verskillende konsentrasies uit te voer.Kleinskaalse kultuurtoetse kan uitgevoer word deur gebruik te maak van 'n reeks IPTG-konsentrasies (bv. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ens.) en die uitdrukkingseffek by verskillende konsentrasies kan geëvalueer word deur die uitdrukkingsvlak van die teikenproteïen op te spoor (bv. Western klad of fluoressensie opsporing).Volgens die eksperimentele resultate is die konsentrasie met die beste uitdrukking effek as die optimale konsentrasie gekies.
Daarbenewens kan u ook na die relevante literatuur of die ondervinding van ander laboratoriums verwys om die algemeen gebruikte IPTG-konsentrasiereeks onder soortgelyke eksperimentele toestande te verstaan, en dan optimeer en aan te pas volgens die eksperimentele behoeftes.
Dit is belangrik om daarop te let dat die optimale konsentrasie kan wissel na gelang van verskillende uitdrukkingstelsels, teikenproteïene en eksperimentele toestande, dus is dit die beste om op 'n geval-tot-geval basis te optimaliseer.
Postyd: 28 September 2023